稀释倒平板法

更新时间:2023-10-20 18:51

稀释倒平板法(Pour Plate Method)又称:浇注平板法。先将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释(如 1 ∶ 10 、 1 ∶ 100 、 1 ∶ 1000 、 1 ∶ 10000 …),然后分别取不同稀释液少许,与已溶化并冷却至 45 ℃左右的琼脂培养基混合,摇匀后,倾入灭过菌的培养皿中,待琼脂凝固后,制成可能含菌的琼脂平板,保温培养一定时间即可出出菌落

基本信息

如果稀释得当,在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落,这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。随后挑取该单个菌落,或重复以上操作数次,便可得到纯培养

两种方法

持皿法

⑴将若干无菌培养皿叠放在左侧,便于拿取。

⑵点燃煤气灯,将火焰调到适中(空气不要太大,以免气流过急)。

⑶倒平板时,先用左手握住锥形瓶的底部,倾斜锥形瓶,用右手旋松棉塞,然后用右手的小指和手掌边缘夹住棉塞并将它拔出(切勿将棉塞放在桌面上),随之将瓶口周缘在火焰上过一下(不可灼烧,以防爆裂,以杀死可能沾在瓶口外的杂菌)。然后将锥形瓶从左手传至右手中(用右手的拇指、食指和中指拿住三角瓶的底部),在这操作过程中瓶口应保持在离火焰2~3cm处,瓶口始终向着火焰。

左手拿起一套培养皿,用中指、无名指和小指托住培养皿底部,用食指和大拇指夹住皿盖并开启一缝,恰好能让三角瓶伸入,随后倒出培养基。一般约倒入12ml的培养基即可铺满整个皿底。盖上皿盖,置水平位置等凝。然后再将三角瓶移至左手,瓶口再次过火并塞紧棉塞。

平板培养基的冷凝方法有两种,一种是将平板一个个摊开在桌面上冷凝,另一方法是将几个平板叠在一起冷凝。前者冷凝速度较快,在室温较高时采用;而后者冷凝速度较慢,可在室温较低时采用,其优点是形成冷凝水少,尤其适用于平板划线等的需要。

叠皿法

此法步骤与持皿法基本相同。不同点是左手不必持培养皿,而是将培养皿叠放在煤气灯的左侧并靠近火焰,用右手拿住三角瓶的底部,左手的掌背对着瓶口,用小指与无名指夹住瓶塞,将其拔出,随即使瓶口过火,同时用左手开启最上面的皿盖,倒入培养基,盖上皿盖即移至水平位置待凝。再依次倒下面的平板。在操作过程中,瓶口应向着火焰保持倾斜状,以防空气中微生物的污染。

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